I mitocondri svolgono un ruolo fondamentale nella regolazione dell’apoptosi (morte cellulare). Il loro spazio intermembrana contiene diverse proteine che vengono liberate attraverso la membrana esterna per partecipare alla fase di degradazione dell’apoptosi.
Qui riportiamo l’identificazione e la clonazione di un fattore che induce l’apoptosi, AIF, che è sufficiente per indurre l’apoptosi di nuclei isolati. L’AIF è una flavoproteina di massa molecolare relativa relativa 57.000 che condivide l’omologia con le ossidoreduttasi batteriche; normalmente è confinato ai mitocondri ma si trasloca nel nucleo quando viene indotta l’apoptosi. L’AIF ricombinante provoca la condensazione della cromatina nei nuclei isolati e la frammentazione su larga scala del DNA.
Induce i mitocondri purificati a rilasciare le proteine apoptogene citocromo c e caspasi-9. La microiniezione di AIF nel citoplasma delle cellule intatte induce la condensazione della cromatina, la dissipazione del potenziale transmembrana mitocondriale e l’esposizione della fosfatidilserina nella membrana plasmatica.
Nessuno di questi effetti è prevenuto dall’inibitore della caspasi ad ampio raggio noto come Z-VAD.fmk. La sovraespressione di Bcl-2, che controlla l’apertura dei pori di transizione della permeabilità mitocondriale, impedisce il rilascio di AIF dal mitocondrio ma non influisce sulla sua attività apoptogena. Questi risultati indicano che l’AIF è un effettore mitocondriale della morte cellulare apoptotica.
SNAREpins: macchinario minimo per la fusione di membrane
Le proteine ricombinanti v- e t-SNARE ricostituite in vescicole a doppio strato lipidico separate si assemblano in complessi SNAREpins-SNARE che collegano due membrane. Ciò porta alla fusione spontanea delle membrane ancorate a temperatura fisiologica.
Gli intermedi ancorati non fusi possono accumularsi a temperature più basse e possono fondersi quando vengono portati alla temperatura fisiologica. È necessaria una fornitura di v- e t-SNARE non assemblati per la formazione di questi intermedi, ma non per la fusione che segue. Questi dati implicano che le SNAREpin sono il macchinario minimo per la fusione della membrana cellulare.
Mutagenesi inserzionale in vitro con un frammento di DNA selezionabile
Viene presentato un nuovo metodo per la mutagenesi inserzionale in vitro di geni clonati in Escherichia coli. Questa semplice procedura combina i vantaggi della mutagenesi del linker del DNA in vitro con quelli della mutagenesi della trasposizione in vivo.
Fa uso del frammento omega, un segmento di DNA di 2,0 kb costituito da un gene di resistenza agli antibiotici (il gene Smr / Spcr del plasmide R100.1) affiancato da brevi ripetizioni invertite portanti segnali di terminazione di trascrizione e traduzione e polilinker sintetici. Il frammento omega viene inserito in un plasmide linearizzato mediante legatura in vitro e le molecole di DNA ricombinante vengono selezionate in base alla loro resistenza alla streptomicina e alla spectinomicina.
Il frammento omega termina prematuramente la sintesi di RNA e proteine, consentendo così la definizione e la mappatura delle unità di trascrizione e traduzione. A causa della struttura simmetrica di omega, lo stesso effetto si ottiene con inserzioni in entrambi gli orientamenti. Il gene della resistenza agli antibiotici può essere successivamente asportato dalle molecole mutate, lasciando dietro di sé i suoi siti di restrizione fiancheggianti.
Sicurezza ed efficacia del trasferimento genico per l’amaurosi congenita di Leber
L’amaurosi congenita di Leber (LCA) è un gruppo di malattie ereditarie accecanti con esordio durante l’infanzia. Una forma della malattia, LCA2, è causata da mutazioni nel gene della proteina 65-kDa specifico dell’epitelio del pigmento retinico (RPE65). Abbiamo studiato la sicurezza della consegna sottoretinica di un virus adeno-associato ricombinante (AAV) che trasporta il DNA complementare RPE65 (cDNA) (numero ClinicalTrials.gov, NCT00516477 [ClinicalTrials.gov]). Tre pazienti con LCA2 avevano un profilo di eventi avversi locali e sistemici accettabile dopo la consegna di AAV2.hRPE65v2.
Ogni paziente ha avuto un modesto miglioramento nelle misure della funzione retinica sui test soggettivi dell’acuità visiva. In un paziente si è sviluppato un foro maculare asintomatico e, sebbene l’evento sia stato considerato un evento avverso, il paziente ha avuto un certo ritorno della funzione retinica. Sebbene il follow-up sia stato molto breve e la vista normale non sia stata raggiunta, questo studio fornisce la base per ulteriori studi di terapia genica in pazienti con LCA.
Effetti di riduzione del peso delle proteine plasmatiche codificate dal gene obeso
Il prodotto genico dell’ob locus è importante nella regolazione del peso corporeo. È stato dimostrato che il prodotto ob è presente come proteina da 16 kilodalton nel topo e nel plasma umano, ma non era rilevabile nel plasma dei topi C57BL / 6J ob / ob. I livelli plasmatici di questa proteina sono stati aumentati nei topi diabetici (db), un mutante ritenuto resistente agli effetti di ob.
Iniezioni intraperitoneali giornaliere di topo o proteina OB ricombinante umana hanno ridotto il peso corporeo dei topi ob / ob del 30 percento dopo 2 settimane di trattamento senza tossicità apparente ma non hanno avuto effetto sui topi db / db. La proteina ha ridotto l’assunzione di cibo e aumentato il dispendio energetico nei topi ob / ob.
Le iniezioni di topi wild-type due volte al giorno con il topo proteico hanno comportato una perdita di peso sostenuta del 12%, una riduzione dell’assunzione di cibo e una riduzione del grasso corporeo dal 12,2 allo 0,7%. Questi dati suggeriscono che la proteina OB svolge una funzione endocrina per regolare le riserve di grasso corporeo.
Identificazione di RANTES, MIP-1 alfa e MIP-1 beta come i principali fattori di soppressione dell’HIV prodotti dalle cellule T CD8 +
L’evidenza suggerisce che i linfociti T CD8 + sono coinvolti nel controllo dell’infezione da virus dell’immunodeficienza umana (HIV) in vivo, sia da meccanismi citolitici che dal rilascio di fattori di soppressione dell’HIV (HIV-SF). Le chemochine RANTES, MIP-1 alfa e MIP-1 beta sono state identificate come le principali HIV-SF prodotte dalle cellule T CD8 +.
Due proteine attive purificate dal supernatante di coltura di un clone di cellule T CD8 + immortalate hanno rivelato l’identità di sequenza con RANTES umano e MIP-1 alfa. RANTES, MIP-1 alfa e MIP-1 beta sono stati rilasciati da cellule T CD8 + primarie e immortalate.
L’attività dell’HIV-SF prodotta da queste cellule è stata completamente bloccata da una combinazione di anticorpi neutralizzanti contro RANTES, MIP-1 alfa e MIP-1 beta. RANTES umano ricombinante, MIP-1 alfa e MIP-1 beta hanno indotto un’inibizione dose-dipendente di diversi ceppi di HIV-1, HIV-2 e virus dell’immunodeficienza scimmiesca (SIV). Questi dati possono avere rilevanza per la prevenzione e la terapia dell’AIDS.
Bovine Plasma Proteins ELISA kit |
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| F290 | Cygnus Technologies | 1 kit (96 wells plate) | 1056 EUR |
Anti-Bovine Plasma Proteins |
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| BPP04 | Cygnus Technologies | 1 ml | 400.8 EUR |
Anti-Bovine Plasma Proteins |
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| BPP04-AF | Cygnus Technologies | 1 mg | 2295.6 EUR |
Anti-Bovine Plasma Proteins |
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| BPP04-PA | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Anti-Bovine Plasma Proteins |
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| BPP04AF-HRP | Cygnus Technologies | 100 ul | 1186.8 EUR |
Bovine Plasma Proteins Antigen Concentrate |
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| F293G | Cygnus Technologies | 400 ul | 585.6 EUR |
Bovine Plasma Proteins Standards Set, A-F |
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| F293 | Cygnus Technologies | 1 ml | 483.6 EUR |
Exosome Purification and Detection Kit (Plasma) |
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| abx290026-25tests | Abbexa | 25 tests | 777.6 EUR |
Mouse Major urinary proteins 11 and 8, Mup8 ELISA KIT |
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| ELI-37512m | Lifescience Market | 96 Tests | 1038 EUR |
p53 and MDM2 proteins-interaction-inhibitor (chiral) |
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| HY-70027 | MedChemExpress | 10mM/1mL | 1254 EUR |
p53 and MDM2 proteins-interaction-inhibitor (dihydrochloride) |
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| HY-70027A | MedChemExpress | 100mg | 4138.8 EUR |
p53 and MDM2 proteins-interaction-inhibitor (racemic) |
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| HY-70028 | MedChemExpress | 100mg | 2606.4 EUR |
Rat Tau Proteins ELISA kit |
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| CSB-E13729r-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Rat Tau Proteins ELISA kit |
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| 1-CSB-E13729r | Cusabio |
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Human Tau proteins ELISA kit |
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| CSB-E12011h-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Human Tau proteins ELISA kit |
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| 1-CSB-E12011h | Cusabio |
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Exosome precipitation from Plasma and Serum |
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| EPStep-PS | ImmunoStep | 5 ml | 356.4 EUR |
ExoQuick Exosome Isolation and RNA Purification kit (for Serum and Plasma) |
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| EQ806A-1 | SBI | 20 preps | 493 EUR |
XCF COMPLETE Exosome and cfDNA Isolation Kit (for Serum and Plasma) |
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| XCF100A-1 | SBI | 20 rxn | 583 EUR |
Major urinary proteins 11 and 8 Polyclonal Antibody |
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| 42636-100ul | SAB | 100ul | 399.6 EUR |
Mouse Major urinary proteins 11 and 8 (Mup11) |
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| 1-CSB-EP361419MO | Cusabio |
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Mouse Major urinary proteins 11 and 8 (Mup11) |
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| 1-CSB-YP361419MO | Cusabio |
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ExoQuick PLUS Exosome Purification Kit - for serum and plasma |
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| EQPL10A-1 | SBI | 10 reactions | 518 EUR |
ExoQuick ULTRA EV Isolation Kit for Serum and Plasma |
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| EQULTRA-20A-1 | SBI | 20 reactions | 941 EUR |
Human Plasma Renin Activity(Plasma Renin Activity) ELISA Kit |
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| QY-E05530 | Qayee Biotechnology | 96T | 433.2 EUR |
Rat Bone morphogenetic proteins ELISA kit |
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| E02B0682-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Rat Bone morphogenetic proteins ELISA kit |
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| E02B0682-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Rat Bone morphogenetic proteins ELISA kit |
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| E02B0682-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Rat Crystal proteins a ELISA kit |
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| E02C0827-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Rat Crystal proteins a ELISA kit |
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| E02C0827-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
