Ingegneria di geni ibridi senza l’uso di enzimi di restrizione: splicing genico per estensione di sovrapposizione

Lo splicing genico per estensione della sovrapposizione è un nuovo approccio per ricombinare le molecole di DNA in giunzioni precise indipendentemente dalle sequenze nucleotidiche nel sito di ricombinazione e senza l’uso di endonucleasi di restrizione o ligasi. I frammenti dei geni che devono essere ricombinati vengono generati in reazioni a catena della polimerasi (PCR) separate. I primer sono progettati in modo che le estremità dei prodotti contengano sequenze complementari.

Quando questi prodotti della PCR vengono miscelati, denaturati e ricoperti, i filamenti aventi le sequenze corrispondenti alle loro estremità 3′ si sovrappongono e agiscono come primer l’uno per l’altro. L’estensione di questa sovrapposizione da parte della DNA polimerasi produce una molecola in cui le sequenze originali sono “unite” insieme.

Questa tecnica viene utilizzata per costruire un gene che codifica per una proteina di fusione a mosaico composta da parti di due diversi geni di istocompatibilità maggiore di classe I. Questo approccio semplice e ampiamente applicabile presenta vantaggi significativi rispetto alle tecniche standard del DNA ricombinante.

Osteoprotegerina: una nuova proteina secreta coinvolta nella regolazione della densità ossea.

È stata identificata una nuova glicoproteina secreta che regola il riassorbimento osseo. La proteina, denominata Osteoprotegerina (OPG), è un nuovo membro della superfamiglia del recettore del TNF. In vivo, l’espressione epatica di OPG nei topi transgenici provoca un’osteopetrosi profonda ma non letale, coincidente con una diminuzione negli stadi successivi della differenziazione degli osteoclasti. Questi stessi effetti si osservano dopo la somministrazione di OPG ricombinante in topi normali.

In vitro, la differenziazione degli osteoclasti dalle cellule precursori è bloccata in modo dose-dipendente dall’OPG ricombinante. Inoltre, l’OPG blocca la perdita ossea associata all’ovariectomia nei ratti. Questi dati mostrano che l’OPG può agire come un fattore solubile nella regolazione della massa ossea e implicare un’utilità per l’OPG nel trattamento dell’osteoporosi associata ad una maggiore attività degli osteoclasti.

Attivazione della trascrizione del gene del fattore di crescita endoteliale vascolare da parte del fattore 1 inducibile dall’ipossia.

The tumor suppressor, PTEN/MMAC1, dephosphorylates the lipid second messenger, phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate

Segregazione di una mutazione missenso nel gene della proteina precursore dell’amiloide con malattia di Alzheimer familiare

CC CKR5: a RANTES, MIP-1alpha, MIP-1beta receptor as a fusion cofactor for macrophage-tropic HIV-1