Sviluppo e validazione di un equipment rapido per l’autenticità della carne murina in prodotti a base di carne con un check PCR specie-specifico.
L’adulterazione di prodotti a base di carne con carne murina rappresenta un’enorme minaccia per la salute dei consumatori e porta a gravi perturbazioni nei mercati alimentari. L’autenticazione delle specie di carne murina è ancora tecnicamente impegnativa. Abbiamo quindi sviluppato un equipment PCR specie-specifico composto da estrazione del DNA di carne murina, reazione PCR e sistemi di identificazione.
Abbiamo progettato nuovi primer universali mirati a regioni altamente conservate sul gene del citocromo b mitocondriale (cyt b) da quattro murini (ratti da laboratorio, topi da laboratorio, ratti selvatici and topi selvatici), nonché primer specifici per la carne di quattro specie animali ampiamente consumate, bovini, pecora, anatra e asino.
Allo stesso tempo, il frammento specifico di cit. B inserito nel pasmid è stato clonato e utilizzato come controllo interno positivo nel equipment. I parametri del equipment di specificità, sensibilità, stabilità e validità sono stati stabiliti utilizzando una polpetta di contraffazione mimica. La specificità del equipment di rilevamento del DNA period del 100% nell’autenticazione delle quattro carni fraudolente di carne mista di bovini, ovini, anatre e asini. Il limite di rilevamento minimo del DNA del campione period 0,1 μg.
Il equipment, che è stato congelato-scongelato fino a 20 volte e conservato per 1 anno, è stato anche potente nel rilevare una quantità di 0,1 mg in prodotti a base di carne di bovino, pecora, anatra e asino contraffatti artificialmente. Il equipment di rilevamento del DNA di specie murine proposto in questo studio è dimostrato un check semplice, accurato ed efficace e può essere applicato all’identificazione di tracce di carne murina nella carne commestibile comune, per garantire l’implementazione realizzabile della supervisione del mercato dei prodotti a base di carne.
Colorante azoico multianalita come equipment di analisi in loco per il rilevamento colorimetrico di ioni Hg2 + e il rilevamento elettrochimico di ioni Zn2 +
Un nuovo chemosensore colorimetrico su misura, (E) -1- (benzo [d] tiazol-2-il) -3- (piridin-3-ildiazenil) naftalen-2-olo (1), contenente benzotiazolo e piridina frazioni collegate attraverso un collegamento azo (-N = N-) è stato progettato e sintetizzato. Il chemosensore sintetizzato ha mostrato un accattivante cambiamento di colore dopo il legame con acetato [AcO-; incolore con ruggine] e mercurio (II) [Hg2 +; incolore con blu verdastro] in ioni CH3CN acquoso 9: 1 (v / v) (pH 7,Zero Tampone HEPES).
Il meccanismo di interazione tra il chemosensore e gli ioni Hg2 + / AcO- è stato confermato da esperimenti di titolazione 1H NMR. Inoltre, il chemosensore colorimetrico 1 ha mostrato potenziali applicazioni sul campo come equipment di analisi in loco e rilevamento di ioni Hg2 + in campioni di acqua reale. È importante sottolineare che il chemosensore 1 ha fornito una risposta elettrochimica selettiva verso gli ioni Zn2 +, un semplice colorante azoico 1 come chemosensore multicanale per la visualizzazione colorimetrica degli ioni Hg2 + e la rilevazione elettrochimica degli ioni Zn2 +.
Confronto tra equipment ELISA commerciali, un check elettrochemoluminescente multiplex prototipo e un check immunologico basato su microsfere multiplex per la rilevazione di una firma diagnostica associata al cancro della vescica a base di urina. ??????
La capacità di misurare con precisione più proteine contemporaneamente in un singolo check ha il potenziale per migliorare notevolmente l’efficienza dei check clinici composti da più biomarcatori. Abbiamo studiato l’accuratezza diagnostica delle due piattaforme di array di proteine multiplex per rilevare una firma diagnostica associata al cancro della vescica in campioni di una coorte di 80 soggetti (40 con cancro della vescica).
I campioni di urina raccolti dalle università di Kyoto e Nara sono stati confrontati con il cancro della vescica istologicamente determinato. Le concentrazioni delle 10 proteine (A1AT; apolipoproteina E-APOE; angiogenina-ANG; anidrasi carbonica 9-CA9; interleuchina 8-IL-8; metalloproteinasi della matrice 9-MMP-9; metalloproteinasi della matrice 10-MMP10; inibitore dell’attivatore del plasminogeno 1- PAI-1; syndecan-SDC1; e fattore di crescita endoteliale vascolare-VEGF) sono stati monitorati utilizzando due piattaforme prototipo multiplex array e un saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) secondo le specifiche tecniche del produttore.
L’intervallo di rilevamento di ciascun biomarcatore è stato migliorato nei saggi multiplex, anche se il limite inferiore di quantificazione (LLOQ) period generalmente inferiore nei equipment ELISA commerciali. L’space sotto le caratteristiche operative del ricevitore (AUROC) dei check multiplex prototipo è stata segnalata essere 0,97 per il dosaggio immunologico basato su microsfere multiplex (MBA) e 0,86 per il dosaggio elettrochemoluminescente multiplex (MEA). Le sensibilità e le specificità per MBA erano rispettivamente di 0,93 e 0,95 e per MEA di 0,85 e 0,80, rispettivamente.
Precisione, valori predittivi positivi (PPV) e valori predittivi negativi (NPV) per MBA erano rispettivamente 0,94, 0,95 e 0,93 e per MEA erano 0,83, 0,81 e 0,84, rispettivamente. Sulla base di questi incoraggianti dati preliminari, riteniamo che un array di proteine multiplex sia una piattaforma praticabile che può essere utilizzata come uno strumento efficiente e altamente accurato per quantificare più proteine all’interno di campioni biologici.
Package di analisi enzimatiche GABA
Abbiamo sviluppato un sistema di analisi enzimatiche che consente una facile quantificazione dell’acido 4-amminobutirrico (GABA). La reazione della GABA aminotransferasi ottenuta da Streptomyces decoyicus NBRC 13977 è stata combinata con quelle del sistema di dosaggio del glutammato sviluppato in precedenza utilizzando glutammato ossidasi e perossidasi.
Il sistema a tre enzimi che consente la formazione di colorante dipendente dal GABA a causa dell’accoppiamento ossidativo tra 4-aminoantipirina e il reagente di Trinder ha consentito una quantificazione accurata di 0,2 – 150 mg / L di GABA. È stata preparata anche una miscela di pretrattamento composta da glutammato ossidasi, ascorbato ossidasi e catalasi che eliminano rispettivamente glutammato, ascorbato e perossido di idrogeno per rimuovere quelle sostanze inibitorie dai campioni.
Pertanto, è stato utilizzato un equipment di analisi costruito per misurare il contenuto di GABA nei campioni di pomodoro. I risultati erano quasi gli stessi di quelli ottenuti con il metodo convenzionale utilizzando la cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem. Il equipment diventerà uno strumento promettente soprattutto per la misurazione in loco del contenuto di GABA nei prodotti agricoli.
Valutazione dei check multiplex real-time PCR equipment RealStar malaria S&T PCR 1.Zero e differenziazione della malaria FTD per la differenziazione delle specie Plasmodium in campioni clinici
Due check PCR commerciali sono stati valutati in uno studio retrospettivo per determinare la loro affidabilità come strumenti per la differenziazione delle specie di Plasmodium nel sangue umano. Un totale di 1022 campioni di sangue da 817 pazienti con malaria sospetta o confermata è stato presentato al German Nationwide Reference Heart for Tropical Pathogens sono stati sottoposti a microscopia della malaria utilizzando pellicole di sangue spesse e sottili, nonché una PCR in tempo reale per la malaria specifica per genere.
Campioni positivi ai parassiti sono stati analizzati con il equipment RealStar Malaria S&T PCR 1.0 (altona Diagnostics) e con saggi multiplex PCR real-time FTD Malaria Differentiation (Quick Monitor Diagnostics) mirati al Plasmodium DNA specie-specifico. ) è risultato positivo per Plasmodium spp.
I due saggi multiplex hanno mostrato caratteristiche prestazionali piuttosto simili e hanno fornito informazioni sulle specie concordanti nel 98,9% dei campioni positivi al microscopio della malaria e nel 95,1% (RealStar) e nel 96,8% (FTD) dei campioni positivi alla PCR specifica per genere. Rispetto a FTD, RealStar ha rivelato una sensibilità ridotta per le infezioni submicroscopiche da P. falciparum di basso livello, mentre FTD non è stato in grado di rilevare P. knowlesi.
I due check PCR per la malaria commerciali valutati sono adatti per discriminare le specie di Plasmodium nei campioni clinici e possono fornire ulteriori informazioni in caso di risultati microscopicamente incerti.
